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荧光染料科普
浏览次数:173发布日期:2020-06-30

当我们做免疫荧光的实验时,市面上会有很多的染料供我们选择,让人眼花缭乱,那到底应该如何选择呢?让我们看看以下介绍

一、荧光标记是什么?

荧光标记就是用荧光基团特异性来标记细胞或者组织样品中所感兴趣的区域。一般常用的荧光标记方法有表达荧光蛋白、细胞器及DNA特异性染料、抗体偶联免疫荧光染料和双光子荧光染料等。


 1活细胞荧光标记选择——荧光蛋白

绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,简称GFP),是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色萤光。在研究中,我们可以将外源基因与GFP DNA进行相连,GFP可以作为外源基因的报告基因实时监测外源基因的表达,对活细胞中的目的蛋白进行精准定位和动态观察。后来GFP经过科学家的改造,衍生出五颜六色的荧光蛋白。

 

GFP图像

 2免疫荧光染料

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。对于表达量高的蛋白,可以在一抗上直接连接荧光基团进行标记,称之为直接标记法。然而大部分样品我们都是采用一抗二抗两步的间接标记法进行信号放大,提升反应灵敏性。

免疫荧光图片

二、具体该如何选择荧光染料?

1)荧光亮度:荧光亮度越高,所需的激发光亮度就更低,可以使用更低的曝光时间进行拍摄。也可以减少光漂白及光毒性。

2)光稳定性:荧光基团的光稳定性即抗漂白能力,越稳定荧光越不容易淬灭。

3)荧光滤光片:荧光染料的选取还要考虑设备本身具有的荧光滤光片,我司提供美国Omega专业荧光滤光片,帮助您完成不同染料的实验。

 

常见的荧光染料
 

 

 

细胞器及DNA荧光染料

实验中,常常需要对线粒体、溶酶体、内质网等细胞器以及DNA进行染色。

▪ 线粒体

观察线粒体经常用的染料就是MitoTracker,它是一种可以透过细胞的染料,有不同的颜色和修饰类型可供选择。

蓝色为DAPI标记细胞核,绿色为Alexa Fluor 488标记细胞微管,红色为MitoTracker Red标记的线粒体

 

 

▪ 细胞核

标记细胞核的染料常用的是DAPI 358/461 nmHochest 350/460 nm
区别是DAPI标记半通透细胞,能够穿透细胞膜,可以用于固定和活细胞之中。Hochest染色剂毒性相对较低,比较适合标记活细胞。

 

DAPI标记细胞核,

 

 

三、如何选择荧光观察工具

用的荧光观察工具就是荧光显微镜了,而其中对于荧光效果重要的组件就是荧光滤光片,它的好坏决定了最终成像的质量及效果,我们使用美国Omega光学专为显微荧光应用设计的荧光滤光片,拥有50年的研发设计经验,效果优于市面上常用的标配产品,极大的提高了荧光效果。

高透过率使荧光更亮、高截止使背景噪音更低,最终实现更好的信噪比效果

 

 

科研级荧光显微镜

1、全新一代无限远色差校正光学系统:日本专家设计进口材料制作的多功能无限远平场半复消荧光物镜,提供清晰明亮、背景黑暗的高分辨率荧光图像;

2、采用德国OSRAM(欧司朗)超高压汞灯:配有全数字式电源控制系统,安全、高效;

3、采用美国进口OMEGA 专业荧光滤光片系统:高端品质展示出色性能:标配UV\B\G(蓝、绿、红)三种标准滤光块组,同时可以根据客户实际应用选配各种对应的滤光块组,达到真正完美匹配,绝佳效果。常见应用包括:M-FISH、钙离子测定、上转换、双光子、多色同时显示

4、采用Sony科研级彩色制冷图像芯片:1英寸超大靶面,2000万超高像素、高分辨率,高传输速度,高敏感度,帮您捕捉最微弱的荧光信号。

5、全中文专业智能荧光图像处理软件:实现图像的采集,处理以及测量以及荧光合成。

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